什么是连接酶？
连接酶是细胞中 DNA 复制所必需的几种关键酶之一，其作用是催化在双链 DNA 分子其中一条链上的核苷酸之间形成磷酸二酯键。DNA 连接酶能够使一条链上的 5’ 磷酸基团与另一条链的相邻 3’ -OH 基之间形成共价连接。该反应的重要性不仅在于能连接核苷酸分子（在 DNA 复制过程中），而且还能修复 DNA 损伤。
DNA连接酶根据辅因子的不同，可分为2类：ATP依赖的连接酶和NAD+依赖的连接酶。
T4 DNA连接酶是首个被发现的ATP依赖的DNA连接酶 （即其反应需要ATP作为辅助因子）。
T4 DNA 连接酶
在酶切实验中，内切酶的限制性消化产生两种类型的 DNA 末端，即粘性末端或钝端。
T4 DNA连接酶可催化双链DNA或RNA中相邻的5 ’磷酸基和3 ’羟基之间形成磷酸二酯键。
T4 DNA连接酶提取自T4噬菌体，是DNA重组技术中最常用的DNA连接酶之一，是研究实验室最好的酶之一，因为它比大肠杆菌提取的DNA连接酶具有巨大的优势，能有效地连接钝端或黏性末端，并修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交链中的单链缺口，而大肠杆菌DNA连接酶只能连接DNA-DNA分子。
连接酶的应用
连接酶在生物技术中最主要的应用在：
1）基因工程-DNA重组和克隆
2）基因测序
基因重组和克隆
基因表达实验从将感兴趣的基因克隆到质粒中开始。为此必须将感兴趣的基因连接到质粒中。质粒经过内切酶限制性酶切反应后产生黏性末端，T4 DNA 连接酶可以非常有效地将感兴趣的基因片段插入质粒酶切部位，连接 dsDNA 的粘性末端。
基因测序
在二代测序文库构建过程中，需要将人为构建的接头连接至PCR产物上，才能固定至测序芯片上的flowcell上完成测序。其中TA克隆连接接头建库是很常见的技术手段，待测序DNA片段在5端磷酸化和3端加“A”后，与带“T”黏性末端的接头互补配对，从而形成一个可上机测序的完整双链。
在进行TA连接时，不同样本类型或核酸片段结构的复杂程度都会影响到连接的效率，因此不同平台的接头也会有所影响，而连接效率会直接影响最终文库的产出。
迈迪安T4连接酶
迈迪安提供的无甘油T4 DNA连接酶核心优势：
无外切酶或内切酶活性
无甘油T4 DNA连接酶（HC）经过高度纯化和测试，确保无任何可能影响该酶连接效率的外切酶或内切酶活性。经过测试，该酶在冻干过程中和常温储存期间没有酶活损失。
无甘油T4 DNA连接酶（HC）与1μg HindIII酶切的λ 质粒DNA（第2&3道）和pUC19 质粒 DNA （第5 & 6道）在37°C下孵育16小时。结果显示，无甘油T4 DNA连接酶（HC）没有检测到外切酶和内切酶活性。
无甘油、可冻干
迈迪安提供的 T4连接酶不含甘油，可通过冻干制备成常温稳定的检测，是用于POC仪器卡壳中的理想选择。
330个单位的T4 DNA连接酶被用于评估其连接750 ng HindIII酶切的λ 质粒DNA的效率，在常温下进行10分钟的标准连接反应，随后在琼脂糖凝胶上进行检测，使用 ImageJ 软件评估相对于T4 DNA连接酶（T0）的连接效率。结果显示，无甘油T4 DNA连接酶（HC）是一种活性较高的酶，其不受冻干的影响，并在水化后保有完整活性。
高浓度，适用于微流控
迈迪安提供的无甘油T4 DNA连接酶（HC）的浓度（Weiss Units）比其他市售连接酶的浓度高2-10倍。因此，其在诊断应用中具有更大的灵活性，是微流控和POC检测的理想选择。
关于连接酶单位的定义
关于连接酶单位目前有三种定义方法：
1.Weiss单位
2.黏性末端单位（CEU）
3.d（A-T）环化单位
Weiss单位
Weiss单位最早是1968年由Weiss提出，1Weiss单位定义为:在37℃下，使用指定的反应条件，在20分钟内将1 nmol的32p标准的无机焦磷酸盐转化为Norit可吸附材料（活性炭）所需的酶量。
Weiss Unit不是DNA连接的直接测量，而是酶腺苷化反应的间接测量，然后确定ATP-PPi交换。这是大多厂家使用的单位。
CEU单位 粘性末端单位（CEU）也可以作为定义连接酶的单位，这是DNA连接的直接测量。 1个CEU定义为在20μL的1X T4 DNA连接酶缓冲液中在16°C下30分钟内给予50%的Lambda DNA Hind III酶切片段连接所需的酶量。1 CEU=0.015 Weiss Unit, 或者1 Weiss Unit=67 CEU。 d（A-T）环化单位 1970年Modrich与Lehman提出了真正度量连接功能的d(A-T)环化单位，又称外切酶抗性检测。1个d（A-T）环化单位的定义为：30°C下 30分钟 内将100nmol/L的d（A-T）（约2kb长）转化成抗外切酶的形式。
虽然与Weiss单位相比，d（A-T）环化单位更接近实际，但仍有一定的问题，例如，环化单位测试中用的是纯AT片段，与实际连接中4种碱基随机排列不符；再说，如果连接酶将片段连接成多聚体而末环化时，仍可能被外切酶组所切；除此之外，与实际上大多数连接反应使用的温度16相比，30度仍显得偏高。因此，目前使用Weiss和CEU单位为主。
即使将市售的T4连接酶浓度统一为统一单位，迈迪安提供的T4连接酶依然是是目前市场上提供的浓度最高的，更有益于在反应体积有限的条件下使用。
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北京迈迪安生物科技有限公司是Meridian Bioscience在中国设立的全资子公司。Meridian BioScience （以下简称：迈迪安）是一家全球领先的生物诊断公司，总部设立在美国，距今已有45年的历史。迈迪安公司分为诊断和生命科学两个部分，在中国地区的主营业务是生命科学产品，包括各种分子和免疫诊断检测的关键原料，如抗原抗体、免疫阻断剂、PCR和LAMP反应的聚合酶和优化的预混液、核苷酸等，为人体、动物、农业、环境及食品安全等各种检测提供全面的解决方案。45年来，迈迪安已经成为全球各领域诊断企业的首选原料供应商！
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摘自网址：http://www.360zhyx.com/home-research-index-rid-77673.shtml